В качестве лекарственного сырья используется трава чистотела (лат. Herba Chelidonii), которую заготавливают в фазу цветения и быстро сушат при температуре 50—60 °C. Сырьё используют в виде 5%-го водного настоя как жёлчегонное и бактерицидное средство при заболеваниях печени и жёлчного пузыря.

Сок чистотела в народной медицине применяется для удаления бородавок, сухих мозолей, папиллом и некоторых других кожных образований. На основе сока делают лекарственные препараты с теми же свойствами.

На основе смеси алкалоидов чистотела изготовляется цитотоксический препарат «украин», применяемый в терапии злокачественных заболеваний в странах СНГ.

Ибн Сина писал, что чистотел большой полезно жевать при зубной боли, «…выжатый сок очень помогает обострить зрение и свести воду (катаракту) и бельмо перед зрачком». В современной медицине чистотел при данных болезнях не применяется, так как он очень ядовит.

Жирное масло семян чистотела предохраняет металл от коррозии. Сок травы используют для чернения металла.

Из травы получают жёлтую краску.

Считают, что чистотел может быть источником люминисцентного красителя биологических объектов. Так экстракт из него превосходит красители примулин и эритрозин, которые применяются в микробиологической промышленности.

На Украине травой чистотела парили кувшины и горшки —— чтобы молоко не прокисало. При этом проявлялось бактерицидное и фунгицидное действие травы на микроорганизмы, поэтому там за чистотелом закрепились названия — глекопар, гледишник, сметанник.